Observação histológica de dentes de golfinho: protocolo

Abstract

Os dentes são estruturas complexas constituídas por múltiplas camadas tecidulares, entre as quais se destacam o esmalte, a dentina, o cemento e a polpa denta ria. Estas camadas apresentam um padra o comum de organização e mineralização, o que requer cuidados específicos na sua preparação histológica. A fixação e descalcificação dos dentes implicam técnicas cuidadosamente controladas, de forma a preservar a integridade dos tecidos moles presentes, particularmente a polpa. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo acessível e eficiente para a preparação histológica de dentes de golfinho, adaptado a s limitações técnicas de um laboratório convencional. Foram obtidas amostras dentárias de espécies de golfinhos, no âmbito do projeto de investigação realizado pelo Laboratório de Ciências do Mar (CIEMAR), pertencente a Universidade de Évora. Após um período de fixação em formol tamponado a 10% durante cinco dias, procedeu-se a descalcificação com ácido fórmico a 5% e ao corte longitudinal das amostras. O processamento foi efectuado manualmente, permitindo a monitorização rigorosa dos tempos de exposição a cada reagente. As amostras foram subsequentemente incluídas em parafina, cortadas com micro tomo e coradas com Hematoxilina-Eosina para observação microscópica. A análise permitiu a identificação das principais camadas dentárias, evidenciando a eficácia do protocolo adoptado. Contudo, foram também observadas limitações, nomeadamente na preservação da polpa e na integridade de alguns tecidos, atribuíveis a constrangimentos metodológicos. Os resultados obtidos demonstram a viabilidade do protocolo proposto, com potencial de aplicação em futuras amostras, desde que se promovam melhorias na técnica de seccionamento e fixação inicial. Abstract: Teeth are complex structures made up of multiple tissue layers, among which enamel, dentin, cementum, and dental pulp stand out. These layers present a common pattern of organization and mineralization, which requires specific care in their histological preparation. The fixation and decalcification of teeth involve carefully controlled techniques to preserve the integrity of the soft tissues present, particularly the pulp. The present work aimed to develop an accessible and efficient protocol for the histological preparation of dolphin teeth, adapted to the technical limitations of a conventional laboratory. Dental samples were obtained from species of dolphins, as part of the research project conducted by the Marine Sciences Laboratory (CIEMAR), belonging to the University of Évora. After a period of fixation in 10% buffered formalin for five days, decalcification was carried out with 5% formic acid and longitudinal cutting of the samples. The processing was done manually, allowing for strict monitoring of the exposure times to each reagent. The samples were subsequently embedded in paraffin, cut with a microtome, and stained with Hematoxylin-Eosin for microscopic observation. Results: Microscopic observation of the obtained slides allowed for the observation and identification of the different layers of tissues constituting the processed tooth. The analysis allowed for the identification of the main dental layers, highlighting the effectiveness of the adopted protocol. However, limitations were also observed, particularly in the preservation of the pulp and the integrity of some tissues, which are attributable to methodological constraints. The results obtained demonstrate the feasibility of the proposed protocol, with potential for application in future samples, provided that improvements are made in the sectioning technique and initial fixation.