Caracterização isoenzimática de clones de azevinho (Ilex aquifolium L.)

Abstract

Com este trabalho pretendeu-se encontrar polimorfismos, por electroforese de isoenzimas, que permitam identificar 24 clones e 2 cultivares de azevinho (Ilex aquifolium L.), nomeadamente as cultivares “Ferox aurea” e “Aureo marginata”. Os zimogramas foram obtidos por dois tipos de electroforese, a electroforese de zona em tampão descontínuo, na qual se utilizou a electroforese em sistema horizontal e a electroforese em sistema vertical (sistema convencional), em gel de poliacrilamida e a focagem isoeléctrica. Utilizaram-se extractos de tecidos de caules (tecidos exteriores ao canibio vascular), retirados por incisão anelar e folhas com alguns meses de idade. As análises foram realizadas para os sistemas enzimáticos: álcool desidrogenase (ADH), chiquimato desidrogenase (SKD), esterase (EST), fosfatase ácida (ACP), glicerol-3-fosfato desidrogenase (G3PDH), glucose-6-fosfato desidrogenase (G3PDH), glutamato desidrogenase (GDH), malata desidrogenase (MDH) e peroxidase (PRX). Apenas se conseguiram obter resultados satisfatórios com os sistemas enzimáticos da esterase (EST) e da peroxídase (PRX), a partir dos quais foi possível distinguir e identificar todos os clones e cultivares estudados. Com a coloração com o nitrato de prata (detecção de polimorfismos através da proteína total) foi possível distinguir e identificar a cultivar “Ferox aurea” relativamente à cultivar “Aureo marginata” e aos clones 8, 9, 10, 12, 26 e 27, que apresentam o mesmo padrão de bandas. Verificou-se que o padrão isoenzimático varia com o estado de desenvolvimento do material recolhido, e também de acordo com o período do ano. Dos sistemas enzimáticos estudados a peroxidase foi aquela que apresentou maiores vantagens, já que permite obter maior discriminação entre os clones e cultivares.