Clonagem e hiperexpressão de genes codificadores de xilanases

Abstract

Neste trabalho utilizou-se a tecnologia de DNA recombinante para amplificar um gene codificador de uma xilanase do Clostridium thermocellum, a partir de DNA genómico isolado da bactéria, usando a tecnologia da reacção em cadeia da polimerase (PCR). O gene foi clonado num vector de expressão procariótica da série pET (Novagen) e sequenciado para confirmar a ausência de mutações, potencialmente acumuladas durante a amplificação. Os plasmídeos recombinantes produzidos neste trabalho foram utilizados para transformar células de Escherichia coli das estirpes BL21, BL21 plys, Tuner e Origami. As estirpes geradas produziram quantidades significativas da enzima recombinante que foi purificada dos extractos proteicos solúveis por cromatografia de afinidade. Resultados preliminares aqui apresentados mostram que a enzima recombinante produzida apresenta actividade endo-xilanásica.